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Amplificazione PCR del DNA di una singola molecola genomico di avvio o il modello low-copia richiede spesso due reazioni di amplificazione sequenziali con coppie di primer nidificate per raggiungere la specificità e la sensibilità necessaria. Primer esterni residui possono causare l'attività di fondo indesiderato durante i cicli nidificati interne. Per aggirare questo problema, abbiamo utilizzato dU contenenti primer per l'amplificazione primo turno e poi uracilN-glicosilasi (UNG) per degradare loro e le estremità dei loro prodotti DNA dU-primer contenenti amplificati. Abbiamo applicato questo metodo per la rilevazione di un esone 11 mutazioni nel gene HEXA. Abbiamo unito la fase di un unico tubo di amplificazione PCR con primer esterni dU con un'amplificazione tandem con primer non-du-nidificati (da qui, il termine è fusa tandem-nested o M New Balance 365 Prezzi / T-nested PCR). Diluizioni seriali di DNA genomico hanno dimostrato che questo metodo potrebbe amplificare un obiettivo specifico da un minimo di tre equivalenti di genoma aploide di DNA stampo. Prodotti specifici sono stati ottenuti dal New Balance Scarpe Tennis DNA di singole cellule in 19 di 20 repliche, con 12 esterno e 28 cicli interni nested PCR, con un intervento UNG fase di digestione. Quando accoppiato con l'analisi mutazionale heteroduplex, questo metodo affidabile distinto mutante rispetto a wild-type frammenti di geni HEXA amplificati da singole cellule senza primer artefatto.
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Vincenzo Di Nicola

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Vincenzo Di Nicola

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